Ο Δρ. Χένρι Τζόουνς, πατέρας του δυναμικού αρχαιολόγου, του στέλνει από την Ιταλία ένα ημερολόγιο που περιέχει πολύτιμα στοιχεία – περιλαμβανομένου κι ενός χάρτη – γύρω από το θρυλικό Άγιο Δισκοπότηρο. Λίγο αργότερα, ο Ιντιάνα πληροφορείται την εξαφάνιση του πατέρα του, οπότε ταξιδεύει στην Ιταλία, μαζί με τον επίτροπο του μουσείου. Μάρκους Μπρόντι, ώστε να αναζητήσει τα ίχνη του. Πράγματι τον βρίσκει σε μια υπό γερμανική κατοχή περιοχή, αλλά η αποστολή διάσωσης γρήγορα μετατρέπεται σε μια κούρσα ενάντια στο χρόνο. Πατέρας και γιος θα πρέπει να βρουν το Άγιο Δισκοπότηρο προτού αυτό πέσει στα χέρια των Ναζί, οι οποίοι σχεδιάζουν να το χρησιμοποιήσουν για την ολοκληρωτική κατάκτηση του κόσμου